交聯4B瓊脂糖微球（Bio-Sep CL 4B）
產品說明書
交聯4B瓊脂糖微球是在4B瓊脂糖微球的基礎上通過交聯使微球的剛性增強，理化性能提高，有利用于工業生產。該介質用于生物大分子的凝膠層析。
1. 外觀
本品為白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質。
2. 理化指標
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項 目 |
指 標 |
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基 質 |
4% 交聯瓊脂糖 |
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排阻極限 |
60000~20×106 (球蛋白) |
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形狀 |
球形 |
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粒徑 |
50~160μm |
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最高流速 |
26cm/h* |
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耐壓 |
0.012 MPa |
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耐熱 |
pH7水中120℃20min |
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pH適用 |
3~13 (長時間) ，2~14(短時間，在位清洗) |
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化學穩定性 |
可耐8mol/L尿素、6mol/L鹽酸胍；可耐有機溶劑，如乙醇、DMF、THF、DMS、CH3Cl、丙酮、二甲基甲酰胺、二氯乙烷、吡啶、乙腈 |
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*檢測條件： 層析柱10mm×300mm *柱床高15cm,25℃, 流動相為0.1mol/LNaCl
3. 包裝
產品以聚胺酯瓶密封包裝，外貼標簽，注明“品名、體積、顆粒大小、保質期、批號、生產日期、生產單位及地址” 等內容。
4. 貯存
產品應密封貯存在4℃~25℃（保存溶液為20% 乙醇），通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。
用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。
5. 注意事項
本品應避免與氧化劑接觸，避免長時間暴露在空氣中
6.運輸
運輸中應避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒、有害物品混運。
7.保質期
暫定5年。
8.應用
本產品具有很高的化學穩定性、高流速、較好的機械性能、可多次重復使用等特點，非特異性吸附低，回收率高，可用有機溶劑及1~2mol/L 的NaOH在位清洗，適用于工業規模生產，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質、核酸及多肽的凝膠色譜純化。
下面簡要介紹介質的使用過程。
8.1 裝柱
凝膠過濾介質的使用對裝柱的要求較高，為了保證分離效果，一般通過柱子上加一個裝柱器來使分離柱裝滿凝膠，或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進行檢驗。
以下過程為通用介質裝填過程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子，可在柱床穩定后將柱床壓緊，接好管路。
⑴讓所有的材料和試劑達到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。
⑵選擇一根一定直徑的柱子，長約30~60cm,根據柱子大小取所需量的凝膠（約為柱床體積的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。勻漿作脫氣處理。
⑶將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務必使底端無氣泡。
⑷用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。
⑸打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩定。用緩沖液平衡柱子，到柱床穩定。
⑹最好用一個裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平，上好柱頭。
8.2平衡
讓緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和pH不變。
8.3上樣
⑴樣品用緩沖液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。含鹽量過大、濃度過小的樣品要先做處理，再上樣。
⑵介質對樣品組分的分離是按組分分子量大小進行的，分子量大的先流出來。
⑶上樣體積約為柱體積的1~2%，越小分離越好。
8.4洗脫
用緩沖液洗脫，洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。
8.5再生
一般用緩沖液洗到平衡，可再次使用。
8.6注意
在裝柱、使用和保存柱子的時候，始終要避免柱子流干氣泡進入。
若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
8.6 在位清洗
⑴ 對于以離子鍵結合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。
⑵ 對沉淀蛋白、對以疏水性結合的蛋白或脂類，可用1M NaOH 去除。
⑶ 對強疏水性結合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產生氣泡。
清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。
8.7注意
在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干氣泡進入。
8.8 去熱源
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時。或用以下方法步驟去除：
⑴ 2倍柱體積的70%乙醇
⑵ 2倍柱體積50mM Tris-Hcl pH7.5
⑶ 1倍柱體積4M尿素
⑷ 3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl
以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制
8.9 消毒
用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。 |
