交聯(lián)6B瓊脂糖微球（Bio-Sep CL 6B）
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
交聯(lián)6B瓊脂糖微球是在6B瓊脂糖微球的基礎(chǔ)上通過(guò)交聯(lián)使微球的剛性增強(qiáng)，理化性能提高，有利用于工業(yè)生產(chǎn)。該介質(zhì)用于生物大分子的凝膠層析。
1. 外觀
本品為白色球狀凝膠,無(wú)嗅、無(wú)味、無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)。
2. 理化指標(biāo)
|
項(xiàng) 目 |
指 標(biāo) |
|
基 質(zhì) |
6%瓊脂糖凝膠 |
|
排阻極限 |
10000~4×106 (球蛋白) |
|
形狀 |
球形 |
|
粒徑 |
50~160 μm |
|
最高流速 |
30 cm/h* |
|
耐壓 |
0.025 MPa |
|
耐熱 |
pH7水中120℃20min |
|
pH值穩(wěn)定性 |
3~13(長(zhǎng)時(shí)間)，2~14(短時(shí)間，在位清洗) |
|
化學(xué)穩(wěn)定性 |
可耐8mol/L尿素、6mol/L鹽酸胍；可耐有機(jī)溶劑，如乙醇、DMF、THF、DMS、CH3Cl、丙酮、二甲基甲酰胺、二氯乙烷、吡啶、乙腈 |
|
|
|
*檢測(cè)條件： 層析柱10mm×300mm *柱床高15cm,25℃, 流動(dòng)相為0.1mol/LNaCl
3. 包裝
產(chǎn)品以聚胺酯瓶密封包裝，外貼標(biāo)簽，注明“品名、體積、顆粒大小、保質(zhì)期、批號(hào)、生產(chǎn)日期、生產(chǎn)單位及地址” 等內(nèi)容。
4. 貯存
產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~25℃（保存溶液為20% 乙醇），通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。
用過(guò)的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。
5. 注意事項(xiàng)
本品應(yīng)避免與氧化劑接觸，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中
6.運(yùn)輸
運(yùn)輸中應(yīng)避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。
7.保質(zhì)期
暫定5年。
8.應(yīng)用
本產(chǎn)品具有很高的化學(xué)穩(wěn)定性、高流速、較好的機(jī)械性能、可多次重復(fù)使用等特點(diǎn)，非特異性吸附低，回收率 高，可用有機(jī)溶劑及1~2mol/L 的NaOH在位清洗，適用于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的凝膠色譜純化。
下面簡(jiǎn)要介紹介質(zhì)的使用過(guò)程。
8.1 裝柱
凝膠過(guò)濾介質(zhì)的使用對(duì)裝柱的要求較高，為了保證分離效果，一般通過(guò)柱子上加一個(gè)裝柱器來(lái)使分離柱裝滿凝膠，或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進(jìn)行檢驗(yàn)。
以下過(guò)程為通用介質(zhì)裝填過(guò)程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子，可在柱床穩(wěn)定后將柱床壓緊，接好管路。
⑴讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。
⑵選擇一根一定直徑的柱子，長(zhǎng)約30~60cm,根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠（約為柱床體積的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。勻漿作脫氣處理。
⑶將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無(wú)氣泡。
⑷ 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
⑸ 打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定。用緩沖液平衡柱子，到柱床穩(wěn)定。
⑹最好用一個(gè)裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平，上好柱頭。
8.2平衡
讓緩沖液以一定流速流過(guò)柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。
8.3上樣
⑴樣品用緩沖液配制，渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。含鹽量過(guò)大、濃度過(guò)小的樣品要先做處理，再上樣。
⑵介質(zhì)對(duì)樣品組分的分離是按組分分子量大小進(jìn)行的，分子量大的先流出來(lái)。
⑶上樣體積約為柱體積的1~2%，越小分離越好。
8.4洗脫
用緩沖液洗脫，洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。
8.5再生
一般用緩沖液洗到平衡，可再次使用。
8.6注意
在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，始終要避免柱子流干氣泡進(jìn)入。
若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
8.6 在位清洗
⑴ 對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。
⑵ 對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用1M NaOH 去除。
⑶ 對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。
清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。
8.7注意
在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干氣泡進(jìn)入。
8.8 去熱源
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時(shí)或用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí)。或用以下方法步驟去除：
⑴ 2倍柱體積的70%乙醇
⑵ 2倍柱體積50mM Tris-Hcl pH7.5
⑶ 1倍柱體積4M尿素
⑷ 3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl
以上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制
8.9 消毒 用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。 |
