去內毒素瓊脂糖微球4B（Removing Endotoxin Bio-Sep 4B）
產品說明書
去內毒素瓊脂糖微球4B是將內毒素類似底物鍵合在4B瓊脂糖微球上形成的一種可利用親和相互作用來實現目標產品純化分離的親和類介質。用于細菌內毒素的去除和生物大分子的純化分離。
1.外觀
本品為白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質。
2.理化指標
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項 目 |
指 標 |
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配 基 |
內毒素類似底物 |
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基 質 |
4%瓊脂糖微球 |
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顆粒形狀及大小 |
球形 50~160 μm |
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去除效果 |
細菌內毒素低于10EU/mg |
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最高流速 |
75 cm/h* |
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耐壓 |
0.01 MPa |
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化學穩定性 |
pH2~11中穩定？;
在一般的緩沖溶液中穩定。 |
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耐熱 |
45℃以下微球無變化，注意不能冷凍，不能高壓滅菌 |
*檢測條件： 層析柱16mm×300mm *柱床高5cm,25℃, 流動相為0.1mol/LNaCl
3．包裝
產品以聚胺酯瓶密封包裝，外貼標簽，注明“品名、體積、顆粒大小、保質期、批號、生產日期、生產單位及地址” 等內容。所選用的包裝應有利于保證產品質量、方便運輸和貯存。
4. 運輸
運輸中應避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒、有害物品混運。
5. 貯存
產品應密封貯存在4℃~30℃（保存溶液為20% 乙醇），通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。
用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。
6.保質期：暫定2年。
7.應用
去內毒素瓊脂糖微球4B是一種親和層析介質，利用樣品中組分親和作用的不同進行分離。用于去除細菌內毒素和生物大分子的純化分離。
去內毒素瓊脂糖微球4B用于去除內毒素有2種使用方式：裝柱吸附或加入樣品溶液中振蕩吸附。下面簡要介紹裝柱吸附的使用過程。
7.1 裝柱
⑴讓所有的材料和試劑達到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）：20mmol/L、pH5.0的乙酸鹽緩沖液。
⑵根據柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用注射用水（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。勻漿作脫氣處理。
⑶將柱內及柱子底端用水潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務必使底端無氣泡。
⑷用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。
⑸打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
7.2平衡
（1）先用10倍柱體積的1.0mol/LNaOH溶液洗滌。再用水洗到中性。
（2）讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和pH不變。平衡緩沖液一般是稀緩沖溶液，常用20mmol/L、pH5.0~8.0的乙酸鹽或磷酸鉀緩沖液，具體pH值視蛋白質樣品而定。
7.3內毒素去除
⑴渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。
⑵一般情況是讓樣品緩慢流過柱子，內毒素結合在柱子上，其他組分流出柱子后收集去除了內毒素的樣品。
（3）若一次去除達不到要求，可以將流出物重新上樣進行多次吸附。
（4）根據具體樣品使用條件要有一定調整。
注：上述各步操作中用到的玻璃儀器、濾器均要250℃干烤2h；0.2µm濾膜要用0.1M NaOH浸泡過夜后121℃高壓滅菌30min；水及溶液都要無內毒素；配制緩沖溶液的鹽要在80℃烘4h后使用。
7.4再生
去內毒素瓊脂糖微球4B可以再生后多次使用。
可用25倍柱體積0.2 mol/L NaOH+20%EtOH洗，再用25倍柱體積1.5 mol/L NaOH洗滌再生。用20mmol/L、pH5.0~8.0的乙酸鹽或磷酸鉀緩沖液平衡后可重復使用。
也可用pH7.2的緩沖溶液洗柱再生，其組成為20mmol/L PBS+15 mmol/L NaCl+0.1%SDC（脫氧膽酸鈉）。用20mmol/L、pH5.0~8.0的乙酸鹽或磷酸鉀緩沖液平衡后可重復使用。 |
